Differential expression of chemoresistance-related genes under the effect of adenosine a3 receptor antagonist in glioblastoma stem-like cells

Resumen

INTRODUCCIÓN
El glioblastoma (GB) es el tumor maligno primario más agresivo y común del cerebro y el sistema nervioso central (1). Sin tratamiento, la supervivencia media del paciente es de unos seis meses, que puede extenderse a quince meses con terapias multimodales (2). La quimiorresistencia observada en el GB se atribuye, en parte, a la presencia de una subpoblación de células madre similares al glioblastoma (GSC), caracterizadas por una mayor capacidad tumorígena y quimiorresistencia (3).
OBJETIVO
Crear una terapia alternativa para el glioblastoma utilizando el receptor de adenosina A3. MATERIALES Y MÉTODOS
Se aplicaron diferentes enfoques analíticos para la genómica funcional: DAVID (Base de Datos para Anotación, Visualización y Descubrimiento Integrado). Se utilizó la herramienta de diagrama de Venn para calcular la(s) intersección(es) de la lista de elementos. Ensemble, un explorador genómico para genomas de vertebrados, se utilizó para predecir las funciones reguladoras. Panther proporciona información completa sobre la evolución de las familias de genes codificantes de proteínas. INSECT 2.0 (Búsqueda in silico de factores de transcripción co-ocurrentes) es un servidor web para biólogos que analizan datos de secuencias genómicas para la predicción y el análisis in silico de módulos cis-reguladores. Se utilizó Glio-Vis como herramienta de visualización de datos para conjuntos de datos de tumores cerebrales. Para validar los resultados de RNAseq, se realizó la extracción de ARN con TRIzol RNA y, posteriormente, la cuantificación de las muestras con NanoDrop. La transcripción inversa se realizó con 1 μg de ARN con MMLV (Promega, Madison, WI, EE. UU.). La cuantificación relativa de RT-qPCR se realizó con el método 2−ΔΔCt, y se utilizó el gen de la β-actina como normalizador (Anexo 1). Todos los datos se registraron por triplicado biológico.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Las células madre de células madre (GSC) se encuentran en nichos tumorales hipóxicos, donde mantienen y promueven el fenotipo similar a la célula madre, y también se han correlacionado con una alta quimiorresistencia. Las GSC tienen la particularidad de generar altos niveles de adenosina extracelular (ADO), lo que provoca la activación del receptor de adenosina A3 (A3AR) con el consiguiente aumento de la expresión y actividad de genes relacionados con la quimiorresistencia. Por lo tanto, la focalización de sus componentes es una alternativa prometedora para el tratamiento del GB. Este análisis determinó genes que fueron regulados positiva e inhibidamente debido al bloqueo del A3AR tanto en condiciones de normoxia como de hipoxia. Además, se analizaron posibles candidatos asociados con la quimiorresistencia que fueron regulados positivamente por la hipoxia y negativamente por el bloqueo del A3AR en la misma condición. Detectamos tres genes candidatos potenciales que fueron regulados por el antagonista del A3AR MRS1220 en condiciones de hipoxia: LIMD1, TRIB2 y TGFB1. (Anexo 2). Finalmente, los marcadores seleccionados se correlacionaron con genes inducibles por hipoxia y con la expresión de ectonucleotidasas productoras de adenosina.
CONCLUSIÓN
Las condiciones hipóxicas generan una amplia expresión génica diferencial en las células madre de la glándula tiroides (GSC), lo que aumenta la expresión de genes asociados con la quimiorresistencia. Además, observamos que MRS1220 podría regular la expresión de LIMD1, TRIB2 y TGFB1, implicados en la quimiorresistencia y correlacionados con un mal pronóstico, hipoxia y señalización purinérgica.